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病原體相關(guān)游離DNA與包蟲病診斷

  • 2019-11-05 14:28
  • 作者:?徐超 傅繼歡
  • 來源:中國醫(yī)藥報

  包蟲病又名棘球蚴病,是一種人畜共患寄生蟲病,主要由人感染棘球絳蟲的幼蟲(棘球蚴)所致。我國有囊型包蟲病和泡型包蟲病兩種,分別由細粒棘球絳蟲的幼蟲和多房棘球絳蟲的幼蟲寄生人體組織器官中導致。兩種絳蟲都必須在哺乳類動物體內(nèi)寄生才能完成生活史。細粒棘球絳蟲的終末宿主一般為犬和狼;多房棘球絳蟲的終末宿主一般為狐貍、犬和狼。


  包蟲病呈全球性分布,在我國主要流行于牧區(qū)和半農(nóng)半牧地區(qū),其中以新疆、西藏、寧夏、甘肅、青海、內(nèi)蒙古、四川7省區(qū)最為嚴重。據(jù)相關(guān)文獻,我國西部地區(qū)人群包蟲病感染率為3.1%~31.5%,患病率為0.5%~5.0%,其中,青藏高原部分地區(qū)人群患病率為5.0%~10.0%。我國西部地區(qū)包蟲病平均患病率為1.08%,受威脅人口約6600萬,每年造成直接經(jīng)濟損失30億元。


  包蟲病診斷依據(jù)


  根據(jù)現(xiàn)行診斷標準,包蟲病的臨床診斷需綜合考慮流行病學史、臨床表現(xiàn)、影像學檢查、實驗室檢查及病原學檢查幾方面。


  流行病學史


  這部分主要考慮患者是否有在流行區(qū)居住、工作、旅游或狩獵史,或與犬、牛、羊等家養(yǎng)動物或狐、狼等野生動物及其皮毛的接觸史;或在非流行區(qū)有從事來自流行區(qū)的家畜運輸、宰殺、畜產(chǎn)品及皮毛加工等暴露史。


  臨床表現(xiàn)


  包蟲病患者的主要臨床表現(xiàn)為棘球蚴的囊占位所致的壓迫、刺激以及囊破裂引起的一系列癥狀。囊型包蟲病可發(fā)病于全身多個器官,以肝、肺為常見;泡型包蟲病原發(fā)病灶幾乎都位于肝臟。


  影像學檢查


  主要通過B超掃描、X線檢查、計算機斷層掃描或磁共振檢查,發(fā)現(xiàn)占位性病變。


  實驗室檢查


  通過酶聯(lián)免疫吸附試驗、間接紅細胞吸附試驗、PVC膜快速ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)、免疫印跡技術(shù)等,對包蟲病相關(guān)的特異性抗體、循環(huán)抗原、免疫復(fù)合物進行檢測。


  病原學檢查


  在手術(shù)活檢材料、切除的病灶或患者排出物中發(fā)現(xiàn)棘球蚴的囊壁、子囊、原頭節(jié)或頭鉤。此為包蟲病的確診方法。


  相關(guān)檢測產(chǎn)品


  對來源于患者或疑似患者人體樣本中的包蟲病感染相關(guān)生物標志物進行檢測是輔助診斷該病的重要手段。相關(guān)生物標志物包括特異性抗體、循環(huán)抗原、免疫復(fù)合物、病原體核酸等。我國已批準四個包蟲病抗體檢測試劑(見表)。已批準產(chǎn)品均采用免疫學方法對樣本中的病原體抗體進行檢測,但免疫學檢測有其自身的局限性:一方面,由于細粒棘球蚴和多房棘球蚴兩種病原體自身抗原存在交叉,導致應(yīng)用抗體檢測來區(qū)分囊型/泡型的效果欠佳;另一方面,抗體檢測無法區(qū)分現(xiàn)癥感染與既往感染。


3


  隨著檢測技術(shù)的進步,病原體核酸及其游離DNA檢測為包蟲病感染的輔助診斷提供了新思路。目前,國際上尚無包蟲病核酸檢測的相關(guān)產(chǎn)品。我國已有細粒棘球蚴和多房棘球蚴核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)獲準進入國家藥品監(jiān)督管理局創(chuàng)新醫(yī)療器械特別審查程序,該產(chǎn)品臨床應(yīng)用的安全性和有效性仍在驗證中。


  病原體相關(guān)游離DNA簡介


  近年來,隨著對寄生蟲血漿游離DNA(cfDNA)的研究取得進展,cfDNA在寄生蟲病檢測中的運用得到快速發(fā)展,目前已有應(yīng)用cfDNA檢測對瘧原蟲、弓形蟲、利士曼原蟲、錐蟲、血吸蟲等寄生蟲感染進行輔助診斷的報道。患者感染寄生蟲后,體內(nèi)出現(xiàn)蟲源DNA,可能是由于蟲體或蟲卵的細胞或碎片在增生、成熟、脫落、腐爛、崩解等過程中主動分泌或被動釋放出的內(nèi)部DNA進入宿主體液循環(huán)系統(tǒng)所致;也有研究表明,絳蟲主動分泌的外泌體是患者體內(nèi)出現(xiàn)蟲源DNA的重要原因?;谏鲜鲅芯?,檢測樣本中細粒棘球蚴和多房棘球蚴兩種病原體cfDNA為該病的輔助診斷提供了理論基礎(chǔ)。


  寄生蟲源cfDNA的檢測在臨床應(yīng)用中具有一定優(yōu)勢。一方面,可根據(jù)特異性的基因序列對兩種不同種類的病原體進行分型,從而達到對疾病分型的目的;另一方面,患者樣本中存在寄生蟲DNA,在一定程度上提示患者可能感染相關(guān)病原體。然而,cfDNA作為一種新的標志物,要達到能夠應(yīng)用于臨床檢測的要求,還需在現(xiàn)有理論的基礎(chǔ)上進一步研究。


  首先,應(yīng)進一步明確患者在疾病不同進展階段的血漿cfDNA濃度變化情況,并以此為基礎(chǔ),確定該標志物的臨床預(yù)期用途(如疾病早篩、輔助診斷、鑒別診斷及治療監(jiān)測等)。


  另外,還應(yīng)依據(jù)所擬定的標志物預(yù)期用途,對該標志物進行臨床驗證,臨床研究應(yīng)考慮入組人群、對照方法等。若將該標志物用于對疾病的鑒別診斷,入組人群應(yīng)為包蟲病疑似感染人群,其中,不同大小占位性病變病例、不同病灶退變病例、不同基因型病例等均應(yīng)入組,還應(yīng)考慮非包蟲病病例的干擾。對用于疾病鑒別診斷的臨床研究,其對照方法應(yīng)為疾病確診的標準,即病原學檢查。


  我國包蟲病防控形勢嚴峻,且該病流行區(qū)多位于相對偏遠、落后的地區(qū)。目前,對包蟲病的診斷在很大程度上依賴于影像學和病原學,這種診斷方式對臨床醫(yī)生的專業(yè)技術(shù)水平有較高的要求,并存在一定程度的誤診、漏診風險。cfDNA檢測方法操作較簡便,結(jié)果易于解讀,若能將其應(yīng)用于臨床,對包蟲病的診斷將起到積極作用。


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(責任編輯:何璇)

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